通过经核注射靶向CRISPR / CAS9基因
基因敲除使用CRISPR技术
为了获得使用CRISPR技术的基因敲除小鼠，由研究者提供的合成，改性的SGRNA或CRRNA / TRRNA将用CAS9蛋白电穿入核核胚胎中。存活下来的胚胎将被移植到培育的雌性胚胎的输卵管中。由该程序产生的所有幼崽都可能是通过靛蓝形成的敲除突变的马赛克。幼崽将转移到调查员进行分析，然后随后与F1代交配以建立种系中的突变。
服务要求，保证和费用
- sgRNA或crRNA/trRNA必须从经过批准的供应商获得，且末端经过修改。请与GEMF联合主任联系，寻求建议。至少需要2µg的sgRNA (1.5 nmol就足够了)。
- CRISPR/Cas9淘汰项目将安排两天电穿孔。
- 我们无法保证正确的目标。
- 由于专利法规，目前仅适用于缺乏基因修改服务的机构的MD安德森调查员或UT调查人员的CRISPR注射。
- 淘金项目费用:MD Anderson研究人员1450美元，其他UT研究人员2378美元
- 额外的日子（根据要求）：725美元/天，其他UT调查人员1189美元
- 一个电穿孔日可以购买代替2天的程序。然而，我们不能保证所有贡献的程序都是最优的:725美元/天，其他UT调查人员为1189美元
- 10个注射胚泡可以要求SGRNA分析：MD安德森调查人员80美元，其他UT调查人员为131美元。
利用CRISPR技术进行基因敲入
为了利用CRISPR技术获得基因敲入小鼠，研究者需要提交DNA(用于同源性驱动修复)和sgrna或crRNA/ trrna。这些材料将与Cas9蛋白混合，注射到原核阶段的胚胎中。存活下来的胚胎将被移植到培育的雌性胚胎的输卵管中。所有由该过程产生的幼犬都可能发生各种突变，包括通过indel形成发生的敲除突变，包含部分或全部DNA供应的敲除突变，或所有这些突变的组合。幼崽将转移到调查员进行分析，然后随后与F1代交配以建立种系中的突变。
服务要求，保证和费用
- 必须从批准的供应商获得合成素生殖器或CRRNA / TRRNA。请与GEMF联合主任联系，寻求建议。需要至少2μg的SGRNA。
- HDR的DNA应作为超硅，双链质粒或SS寡核苷酸供体供应。如果纯化，则需要至少3μg。为了通过GEMF纯化，需要至少30μg。所有DNA必须使用无内毒素的程序分离。请咨询Gemf Co-Director，以协助确定最佳DNA捐赠者以实现您的目标。
- CRISPR/Cas9敲入项目将安排3天的注射时间。
- 我们无法保证正确的目标。
- 由于专利法规，目前仅适用于缺乏基因修改服务的机构的MD安德森调查员或UT调查人员的CRISPR注射。
- 敲门式注射费：MD Anderson调查人员2,200美元，其他UT调查人员为3,607美元。
- 额外注射天数(根据要求):730美元/天。
- 10个被注射的胚泡可能需要进行sgRNA分析:MD安德森研究人员80美元，其他UT机构缺乏基因修饰服务的UT研究人员131美元。