细胞成像
所述FCCIC维护三个主要仪器：一个蔡司LSM880激光扫描共焦显微镜，在Leica TCS SP8 DIVE光子显微镜，和一个蔡司宽视场显微镜，并提供所有仪器以及专用了Imaris图像处理辅助用服务（每小时收费）工作站。培训和无助的使用（以折扣价格）可用于LSM880共聚焦显微镜和工作站了Imaris。共焦时间推移成像是在下班时间和周末在打折时薪独立用户可用。附加服务包括：振动切片机切片，免疫荧光染色（标准和厚的组织），宽视场成像（辅助，非辅助和培训）和了Imaris图像处理。服务费发生变化，并且通过提供iLab的随着我们的服务申请表。请联系Collene杰特（cjeter@mdanderson.org)，以便安排初始服务。
服务和应用程序
共焦成像
蔡司LSM880激光扫描共聚焦显微镜允许高分辨率，细胞和组织切片的多光谱成像。应用包括：多光谱成像，Z-堆叠和三维共焦成像，超分辨率成像，激光microirradiations，活细胞成像，蛋白质 - 蛋白质相互作用（例如，FRET，PLA，附设）和细胞的跟踪分析。将96孔板适配器提供了一种用于高通量成像在任共焦或宽视场的系统和两个系统都配备有孵育和CO2控制用于活细胞成像。细胞成像服务包括培养的细胞，冷冻和FFPE样品定制免疫荧光染色。附加细胞成像光学显微镜的服务包括使用位平面的软件了Imaris实现3D和4D图象再现和先进的定性和定量图像分析的Zeiss Axio上观察者落射荧光显微镜和图像处理宽场成像。有关详细信息，请参阅仪表。
多光子成像
莱卡TCS SP8 DIVE多光子（MP）显微镜使用红外激发光，这提供了更深入渗透到厚的组织，并且可以被用来检查厚的部分，完整的器官，以及与最大成像深度体内过程，最小的光散射，提高ž- 分辨率，并且降低光毒性。Z-栈与瓦片扫描相结合，可呈现体积以产生3D重建和用于形态测定分析。
为了支持多光子成像，FCCIC还配备了一台徕卡VT1200S自动振动器，用于切割厚组织，以及一台徕卡M165FC荧光立体显微镜，用于显微解剖和组织制备。FCCIC提供振动器切片和组织制备服务，以及定制的厚组织免疫荧光染色服务。有关详细信息，请参阅仪表
其它服务和应用显微镜
- 多光谱荧光成像
- 免疫荧光染色
- 了Imaris（位平面）图像处理
- 蛋白分布和共定位研究
- 三维重建和组织形态分析
- UVA激光Microirradiation DNA损伤修复
- FRET和FRAP
- 活细胞成像
- 振动切片机切片
- 咨询和培训
培训
细胞成像建议第一次用户联系Collene Jeter (cjeter@mdanderson.org)在确定实验计划前安排谘询时间。该咨询将允许用户和核心人员讨论实验设计、对实验室服务的期望，以及服务成本的范围内的项目。
核心建议用户至少在服务日期前一周安排约会。这对于需要培训和/或工作人员协助的用户尤其重要。
任何使用细胞成像核心进行无辅助共焦成像的用户都必须接受仪器培训。训练由科林队长(cjeter@mdanderson.org）并且将包括在多天的时间块。在完成培训，结业证书将给予奖励。
核心的工作人员可以引导用户来优化样品制备，仪表和成像参数的选择和开发用于调查新的应用。核心还可以帮助用户理解和应用图像处理软件（如位平面的了Imaris软件），也可以针对特定的项目进行分析，如时间允许，额外收费。
请注意，每个用户负责归档他或她自己的数据。核心人才可以帮助用户学习这种做法。
仪表
蔡司LSM880和Airyscan
Zeiss LSM880共聚焦显微镜有5个激光器用于有效激发从蓝色到远红色的荧光团，一个355 nm激光器用于DNA损伤修复研究，一个Airyscan探测器允许近超分辨率成像，一个FRET/FRAP模块，和一个培养箱用于延时成像。Airyscan提供比传统GaAsP探测器更好的信噪比(SNR)，在所有空间维度上提高1.7倍的分辨率(横向最高可达140nm，轴向最高可达400nm)。快速Airyscan成像方式提供了高灵敏度，分辨率和速度之间的平衡，以最快和温和的成像的活细胞和组织。结合我们的UVA微辐照激光研究人员可以量化DNA损伤和修复成像分子之间的动态相互作用的DNA损伤位点。处理(例如FRAP和光激活/转换)模块可以分析动态分子过程，而FRET模块可以分析候选的蛋白质-蛋白质相互作用。这个范围与Bitplane的Imaris图像处理软件相结合，将允许对z堆叠图像进行3D重建、定量分析和细胞跟踪分析。
蔡司LSM880共焦图像
用LAMP1(绿色)和LC8(红色)染色的小鼠成纤维细胞的超分辨率图像，分别显示溶酶体和动力蛋白运动复合物(由Bratton实验室提供)。
5x5瓦片扫描显示细胞核中DNA损伤病灶(绿色)，53BP1(红色)(蓝色)。
在开发过程中胸腺上皮细胞规范的多光谱的分析。两个转录因子（红，绿）指定细胞命运（里奇的实验室提供）。
四幅图显示再生前列腺细胞，基底细胞(红色)和管腔细胞(绿色)特征。
缝合镶嵌的视图，示出在前列腺异质25个字段。基底细胞（红色），管腔细胞（绿色），细胞核（蓝色）。
结肠隐窝干细胞标记物的功能分析。干细胞(绿色)，分化的窗格细胞(红色)，细胞核(蓝色)。
生殖细胞发育中微管蛋白翻译后修饰的分析。乙酰化微管蛋白(红色)，细胞核(蓝色)。
徕卡TCS SP8 DIVE光子显微镜
莱卡TCS SP8 DIVE可以用来检查厚的部分，完整的器官，以及与最大成像深度，最小的光散射，z分辨率增加，并且降低了光毒性体内过程。所述SpectraPhysics洞察X3与双激光线包含一可调谐的线可以被调谐到680和1300nm和1040纳米的固定行加上可变基于二向色谱检测之间提供几乎同时的，多通道采集光谱分离任何荧光。加上4独立调谐的高QE非退扫描杂交体（HYD）检测器，该系统提供的光谱的自由和在荧光检测最大效率。在所述透射光路的附加探测器为第二（和第三）谐波最佳的。徕卡DIVE光束路由光学用VARIO扩束器允许光束直径和焦点的动态调整，以优化的可见光和红外波长，以及调整所述激发斑点为根据的需求最大深度或最大分辨率的共定位激发光束本实验。The scan optics of the Leica SP8 DIVE MP system are optimized for transmission and chromatic correction from 400 nm to 1300 nm and include a 16X mixed immersion (e.g. Clarity) vey long working distance objective (NA 0.8, w.d. 8.1 mm), a 25X water immersion dipping objective (NA 0.95, w.d. 2.6 mm) and 40X water coverslip corrected objective (NA 1.1, w.d. 0.65 mm). To support multiphoton imaging, the core also maintains a Leica VT1200S automated vibratome to cut thick tissues and a Leica M165FC fluorescence stereomicroscope for microdissections and tissue preparation
徕卡TCS SP8潜水多光子图像
GFAP染色的脑组织(绿色)，-3管蛋白染色的脑组织(红色)分别显示星形胶质细胞和神经元，DAPI染色的细胞核(蓝色)。
肠隐窝的双光子图像。Lgr5-GFP(绿色)标记隐窝干细胞，Ki67(红色)标记增殖细胞，Ecad(灰色)标记上皮细胞。(由陈氏化验所提供)
心脏血管的双光子图像。使用Imaris 9.1 (Bitplane)软件绘制三维体积，分别可视化血管通道(绿色，PECAM1)和心脏组织通道(红色，phalloidin)。(由登特实验室提供)
Zeiss倒置Axio上观察
我们的Axio上观察的宽视场荧光显微镜配备有DIC / Nomarksi光学和全方位的目标（10X，20X，40X，63X和100X），以满足成像需求。此外，它有一个培养室，从而使其可用于延时成像应用。
徕卡VT1200S振动切片机
所述芯还维护的Leica VT1200S自动化振动切片机切割厚的组织和用于组织制备显微切割荧光显微镜。
Imaris图像处理工作站
位平面的了Imaris C1包装图像处理软件可实现共聚焦和多显微镜图像的先进的定性和定量图像分析。功能包括2D，3D和4D细胞图像包括3D重建的分析，斑点/囊泡/细胞器定量，形态测定分析，细胞追踪，共定位分析，定量和统计学分析。模块包括：核心了Imaris，MeasurementPro，华帝，轨道，Coloc，细胞和XT。
链接和资源
一般信息
在确定您的实验计划之前，请咨询Collene Jeter, PhD (cjeter@mdanderson.org)，她也提供仪器培训和新协议开发。
在加入珍贵的样品和/或试剂之前，对所有载玻片进行预筛以保证质量。
总是包括适当的对照(例如正常抗体，同型对照，仅二抗，等等)
如欲预约需要协助使用仪器的预约，应至少提前一星期提出。由于时间方便，约会安排在下个星期。
只有经过培训和授权的用户可以使用成像设备。
不允许个人数据设备，如硬盘驱动器和闪存驱动器。请联系核心员工的方法来传输数据。
设备的任何和所有问题都应及时报告给核心人员。
