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我们的大多数实验室协议都基于杰夫·罗森实验室在贝勒医学院。
我们已经将标准单层培养中的标准单层克隆形成试验改编为Dontu等人描述的非粘附性生长因子富集培养中的3D干细胞促进培养,Genes Dev.2003年5月15日;17(10):1253-70(伍德沃德和布里斯托,萨明辐射公司)。2009年4月;19(2):87-95).
将干细胞促进培养条件纳入克隆形成分析的潜在价值。克隆形成分析是通过消化肿瘤或胰蛋白酶化细胞系来分离单个细胞。
在里面图1,在中心区域(阴影浅粉红色)中突出显示各种单个细胞(多效和终端差异)。在蓝色盒子中突出了来自每种类型的单细胞的可能克隆菌落。左侧是体外菌落,如果培养条件(标准单层)没有促进茎或祖细胞的存活或膨胀,则从细胞中生存辐射产生。在这种情况下,所有菌落将代表电镀/辐射后能够多个切口的分化细胞。这不会提供有关茎/祖群的辐射率的信息。右侧是如果培养条件(3D,无血清,生长因子富集)促进茎或祖细胞和分化细胞的存活或扩展,则在细胞中生存辐射的体外生存辐射的菌落。在这种情况下,菌落将代表镀液/辐射群和茎/祖群的菌落后能够多种散射的分化细胞。基于该模型,仅在促进茎/祖细胞的培养条件下,可以在促进茎/祖细胞的培养条件下或代替分化细胞,测量辐射对茎/祖细胞的影响。