反相蛋白阵列(RPPA)核心设备
吕一玲,Rehan Akbani
主任,主任
概述
反相蛋白阵列(RPPA)核心为研究人员提供了强大的、高通量的、定量的、经济有效的功能蛋白质组学研究技术。此外,我们不仅为MD Anderson的调查人员提供集中的、标准化的和质量控制的服务,而且为世界各地的调查人员提供服务,还为包括TCGA、CCLE和ICBP在内的多个国家财团提供服务。
RPPA和功能性蛋白质组学的优点
RPPA
核心定义了一套标准裂解物,用于每个阵列的数据生成和分析的质量控制(QC)。一套算法和定制软件应用程序已开发,以提高量化和质量控制。
- 成本效益:一个高吞吐量的方法同时测试和量化超过1000个样本在一个信号幻灯片。
- 敏感:适用于非常小的样本量(ng的蛋白裂解物,检测特异性蛋白的分子),小于10个细胞当量。它检测并量化了在40 ug细胞裂解液中表达水平和修饰状态的数百种不同的蛋白质。
- 定量:重组蛋白/磷酸肽使蛋白质表达和改性水平的绝对定量能够。
- 简单:不需要直接标记裂解液样品。
功能蛋白质组学
对癌症等复杂疾病的研究表明,基因改变并不是导致该疾病的全部原因。蛋白质水平和结构的变化也被证明在肿瘤的发展和进展中起着关键作用,这是基因变化所不能反映的。在癌症中,一些遗传和表观遗传的变化往往需要疾病的发展。研究大规模的表观遗传变化,如蛋白质磷酸化或分裂,将极大地帮助了解原因和确定癌症和其他复杂疾病的有效治疗。
我们独特的平台
MD Anderson的RPPA核心是科学界的宝贵资源,因为它具有其RPPA管道各方面的独特和持续的验证和质量控制,包括以下:
- 对每个样品进行连续稀释,以捕获线性抗体/抗原反应,以进行准确的数据分析
- 一个持续的和高度严格的抗体验证过程,以选择和保持最高质量的抗体用于RPPA分析
- 打印在每张幻灯片上的48个独特细胞裂解物的“锚”作为对照,用于开发基于复制的标准化,用于数据生成和分析的质量控制,以及不同幻灯片上的RPPA数据合并
- 一系列严格的质量控制流程为我们的RPPA数据分析开发、实施和优化,为客户提供可靠的数据:空间校正算法、抗体检测的质量控制、蛋白装载校正、基于复制的归一化和抗体批次的质量
- 用于减少手工劳动力,人为错误和客户周转的RPPA管道流程的自动化程序
- 一组算法和自定义软件应用程序,以提高量化和质量控制
方法
RPPA表示肿瘤组织和培养细胞的基于抗体的功能蛋白质组学分析。RPPA表征基础蛋白表达和修饰水平,生长因子或配体诱导的效果,以及适合于系统生物学分析的时间分辨反应。它提供了整合癌症中遗传畸变的结果,以验证治疗靶标,证明药物和偏离靶向活动,并评估药物药效。
核心格兰特引用
RPPA核心由NCI Grant#Ca16672和叶林Lu的NIH博士提供支持#R50CA221675:癌症中的反相蛋白质阵列功能蛋白质组学。如果您的出版物使用由RPPA核心生成的数据,请在确认部分中引用这些补助金。发表的两份副本承认这些补助金也应在1058年提交给RPPA核心。谢谢!